Uns Purification of an α-Fibrinogenase with thrombin-like and kallikrein-like activity from Bothrops leucurus snake venom

Bothrops leucurus snake venom

Resumo

Uma enzima com atividade thrombin-like proveniente da peçonha bruta de Bothrops leucurus, denominada TL-Leuc, foi purificada em duas etapas cromatograficas, utilizando as resinas de troca iônica CM-Sepharose e gel filtração Sephacryl S-300. Esta protease mostrou-se homogênea em SDS-PAGE e quando analisada em MS/MS (MALDI TOF\TOF) apresentou massa de 30710,25 e 32109,69Da após alquilação e redução. Os peptídeos com pontuação significativa foram comparados com os de outras proteínas utilizadas no display de alinhamento NCBI-BLAST2, mostrando semelhança com outras serina proteases. O TL-Leuc apresentou atividade proteolítica sobre o fibrinogênio, sendo capaz de degradar apenas a cadeia αA. A enzima causou desfibrinogenação quando administrada por via intraperitoneal em camundongos, tornando o plasma incoagulável. Tl-Leuc mostrou alta capacidade de coagular plasma bovino e alta atividade de coagulação em plasma bovino e solução de fibrinogênio. A atividade hidrolítica do Tl-Leuc sobre os substratos S-2238, S-2266 e S-2302 sugere que esta enzima possui atividades semelhantes à trombina e à calicreína, respectivamente. A enzima TL-Leuc não apresentou atividades hemorrágicas, miotóxicas e fibrinolíticas. Tomados em conjunto, nossos dados mostraram que o TL-Leuc é, de fato, uma isoforma enzimática semelhante à trombina isolada do veneno da cobra Bothrops leucurus.